01
前 言
基质胶是3D细胞培养、类器官、成瘤、侵袭、血管生成等实验的“万能支架”。然而,从解冻到铺板,从浓度选择到结果判读,稍不留神就可能“翻车”。翌圣生物结合上万次实验反馈,整理出这份“避坑指南”,助你一次上手,稳拿高分数据。
02
到货 & 储存
问题 |
翌圣建议 |
收到货后如何保存? |
将本产品置于-20℃环境存放;若短暂放置,4 ℃不超过7天。 |
能否反复冻融? |
不建议反复冻融;首次融化后立即分装(200 µL/管),-20 ℃保存。 |
如何进行融化? |
冷冻状态的基质胶可以在操作前一天埋藏于碎冰中,再转移入4 ℃冰箱,次日即可使用。适当延长4℃融化时间可以有效减少基质胶中的气泡。 |
03
颜色/浓度怎么选?
类型 |
特点 |
适用场景 |
含酚红 |
pH指示 |
常规实验都可以使用含酚红产品,由于酚红存在时,在温度、pH不同的情况下液体会出现颜色的差异,颜色可以在明黄色至暗红色之间变化。 |
无酚红 |
无颜色干扰 |
涉及颜色检测的实验,推荐使用不含酚红的基质胶,如对子宫内膜细胞培养必须使用不含酚红的基质胶。此外,酚红是一种潜在的内分泌干扰物,有可能会干扰实验动物体内激素的自然产生和代谢能力。 |
标准浓度 |
蛋白浓度:8 - 12 mg/mL |
Transwell实验、皮下成瘤实验 |
高浓度 |
蛋白浓度:18 - 22 mg/mL,凝胶3-5 min |
皮下成瘤中较难成瘤的细胞系 |
低生长因子 |
标准浓度基质胶的基础上做了减生长因子处理 |
类器官培养、血管生成 |
04
实验细节
场景 |
高频问题 |
解决锦囊 |
皮下成瘤 |
荷瘤不成功可能的原因 |
取处于对数生长期的细胞,细胞达 80 - 90% 左右密度为宜 |
选择 4 - 6 周龄裸鼠,小于 4 周可能不耐受过早死亡,大于 6 周免疫力会增强,不易成瘤。 |
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可能是小鼠免疫排斥,建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠 |
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可以在接种后一周补种1次,可以很好的提高成功率 |
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肿瘤长起来后又消失的原因 |
很可能是由于炎症反应,肿瘤细胞被小鼠自身吸收造成的。若后续肿瘤依旧未长出来,可考虑更换免疫缺陷程度更大的小鼠。 |
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血管生成 |
成管实验中细胞 不能形成连续的网格 |
建议使用3-5代状态较好且融合度70%-80%的HUVEC细胞 |
细胞数量过少会使细胞无法形成连续的网络 |
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4 - 18 h可见血管生成。建议每4个小时观察一次。 |
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侵袭实验 |
细胞不转移 |
细胞侵袭转移能力比较弱 |
细胞的活性太差,活性不好的细胞做侵袭实验难度较大 |
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用胰酶消化后,必须将含血清的培养基洗去 |
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类器官实验 |
类器官传代的标准 |
不同类器官时间不同,通常7-14日、直径100-200um左右可以传代,有些发育慢的可能要数周才能发育到适合传代状态。 |
鉴定类器官的方法 |
最基础的通过显微镜和H&E染色观察类器官形态;进一步可以用免疫荧光检测该类器官是否表达相应的biomarker; |
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为什么观察到的形态却和文献不一致? |
决定类器官形态的因素有很多,样本来源是否相同、选用的细胞因子品质是否有差异都有可能改变最终的类器官形态。 |
05
产品详情
产品名称 |
货号 |
规格 |
Ceturegel® Matrix LDEV-Free基质胶 |
40183ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 |
40184ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix GFR,LDEV-Free 基质胶 |
40185ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix GFR,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 |
40186ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix High Concentration,LDEV-Free 基质胶 |
40187ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix High Concentration,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 |
40188ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix High Concentration,GFR,LDEV-Free 基质胶 |
40189ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free 基质胶 |
40190ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 |
40191ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free Plus基质胶 |
40192ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |